用1.5ml的无菌ep管,移液器移取560μl avl裂解液,加入5.6μl carrier rna,加入140μl的已灭活的待提取核酸的待测样本,涡旋振荡15s,室温静止10min。将上述ep管放入离心机内瞬时离心以去除可能残留在ep管盖上的裂解产物,防止污染。裂解完成后,加入560μl无水乙醇,振荡混匀15s,将上述ep管放入离心机内瞬时离心以去除可能残留在ep管盖上的裂解产物,防止污染。
向离心柱加入裂解产物630μl,8000转离心1min(可参考海昌仪器型号:tg-16r台式微量冷冻离心机),若离心机在生物安全柜之外,每次使用都需进行外表面**。更换新废液收集管,要从离心机中小心取出离心柱,将上层离心柱转移到新收集管中,继续将剩余裂解产物630μl加入离心柱中,若样本体积大于140μl时需重复此步骤,直到全部裂解产物都过柱离心,8000转离心1min,小心将离心柱转移到新的收集管中。
取500μl aw1加入离心柱中(注意,此处加样操作时务必将移液器吸头接触离心柱内壁缓慢加样),8000转离心1min。小心取出离心柱,更换新的收集管。
取500μl aw2加入离心柱中,14000转离心3min(可参考海昌仪器型号:tg-16r台式微量冷冻离心机) ,小心取出离心柱,更换新的离心柱上端收集管,置于离心机中使用*大转速离心1min,以确保将aw2中的残液离心干净。
取无菌1.5mlep管收集核酸,将离心柱上端小心放入1.5mlep管中,取40-60μl的洗脱液ave加入到离心柱中(注意:洗脱液应尽量全部覆盖住离心柱膜),用ep管管盖盖住离心柱,使用无菌剪刀剪去原离心柱管盖。
室温静止1min,将其放入离心机中8000转离心1min,回收核酸。丢弃离心柱,ep管中即为获取的提取核酸,做好标记与登记。